1. C57小鼠，8-10周，通過頸椎脫位處死，浸入75%乙醇浸泡5分鐘，轉移到通風柜中的(de)解剖盤中。

2. 使用眼科(ke)剪和鑷子，使(shi)髖關節脫臼，保持股骨頭完整(zheng)。

3. 用止(zhi)血(xue)鉗去除(chu)每(mei)個股骨頭的軟骨帽，將組織放入含(han)2%雙抗(kang)的PBS中(zhong)。

4. 用(yong)冰(bing)冷的含(han)2%雙抗的PBS清洗(xi)2-3遍，將(jiang)關節軟(ruan)骨小心移到2ml離心管中。

5. 用眼(yan)科剪(jian)刀將軟骨帽剪(jian)成約1mm3的碎片，加入3ml預熱(re)的Collagenase D（1.5mg/ml）。

6. 放入37℃、80rpm的搖床中進行第一次消化(hua)，時間(jian)2h 。

7. 第一次消化結束后，加入含(han)血清的培(pei)養基終止消化，40um的細胞篩過濾后(hou)，離心1500rpm，2min。

8. 沉淀用DMEM培養基重懸(xuan)，計數(shu)，種植(zhi)在(zai)24孔板中。

9. 在未消化的組織中(zhong)加(jia)入(ru)3ml預熱的Collagenase D，放入37℃、80rpm的搖床中進行第(di)二次消化，時(shi)間2h，然后收(shou)集細胞(bao)。