一、背景

　　神經元原代培養是將胚胎哺乳動物中樞神經(jing)(jing)系統的(de)部分(fen)(fen)組(zu)織(zhi)，如(ru)大腦皮(pi)層、海馬、脊髓等腦組(zu)織(zhi)直接(jie)取出，再接(jie)種(zhong)培(pei)養(yang)的(de)方(fang)(fang)法。目前國內、外有關神經(jing)(jing)元培(pei)養(yang)的(de)方(fang)(fang)法較多，但在(zai)原代培(pei)養(yang)中神經(jing)(jing)元的(de)純度和產量方(fang)(fang)面還存(cun)在(zai)一些(xie)急待(dai)解決的(de)問(wen)題。由于神經(jing)(jing)元是一種(zhong)高度分(fen)(fen)化的(de)細(xi)胞，相對于其它細(xi)胞而言，神經(jing)(jing)元在(zai)體(ti)(ti)外更難以存(cun)活和生長。因此，體(ti)(ti)外培(pei)養(yang)神經(jing)(jing)元要求的(de)培(pei)養(yang)方(fang)(fang)法和營養(yang)條件均較為(wei)特殊(shu)。

　　神(shen)(shen)經(jing)(jing)(jing)(jing)細(xi)胞的(de)體(ti)外培養技術是研(yan)究(jiu)神(shen)(shen)經(jing)(jing)(jing)(jing)源性(xing)疾病(bing)(bing)(bing)(bing)的(de)發病(bing)(bing)(bing)(bing)機制、進程的(de)一(yi)個重要工具，能很好的(de)、直觀的(de)反映(ying)離體(ti)神(shen)(shen)經(jing)(jing)(jing)(jing)元(yuan)的(de)發育(yu)狀況和生理活性(xing)，如何建立一(yi)個穩(wen)定成熟的(de)神(shen)(shen)經(jing)(jing)(jing)(jing)細(xi)胞培養體(ti)系(xi)是神(shen)(shen)經(jing)(jing)(jing)(jing)系(xi)統疾病(bing)(bing)(bing)(bing)體(ti)外實驗研(yan)究(jiu)順利進行的(de)基礎。隨(sui)著基礎醫學及(ji)臨床(chuang)醫學研(yan)究(jiu)的(de)逐(zhu)漸深入，神(shen)(shen)經(jing)(jing)(jing)(jing)細(xi)胞的(de)體(ti)外培養技術在腦損傷、神(shen)(shen)經(jing)(jing)(jing)(jing)障礙性(xing)疾病(bing)(bing)(bing)(bing)、衰(shuai)老相(xiang)關神(shen)(shen)經(jing)(jing)(jing)(jing)疾病(bing)(bing)(bing)(bing)方面得到廣泛(fan)重視和普及(ji)應用。

　　二、神經元原代培養細胞實驗步驟

　　(1)75%(體積分數)酒精消毒(du)孕鼠(shu),在(zai)無菌(jun)條件下取出胎鼠(shu),分離(li)并切取脊(ji)髓,置于冷的(de)無鈣、鎂(mei)的(de)HBSS液的(de)平(ping)皿(min)中(下置冰袋)。

　　(2)解剖顯微鏡無菌(jun)條(tiao)件下仔細剝離(li)脊膜及血管。

　　(3)用(yong)彈(dan)簧剪(jian)將脊髓剪(jian)成1cm3大小，消化(hua)液37℃消化(hua)15-20min，每五分(fen)鐘振(zhen)蕩一次；

　　(4)去掉上(shang)清，加(jia)入終(zhong)止(zhi)(zhi)液(ye)終(zhong)止(zhi)(zhi)消化(hua)，吹打(da)10-15次，不能有氣泡，收集上(shang)清，剩(sheng)余組織再消化(hua)一次。

　　(5)4℃1000rpm離心(xin)10min，棄上(shang)清，加入(ru)種植液1重懸，培(pei)養箱內差速(su)貼壁30min；

　　(6)收(shou)集上清，臺盼藍染色(se)計數，按6*105cells/孔種(zhong)入六孔板（種(zhong)植液1），37℃，5%CO2，95%飽和(he)濕度的培養(yang)箱中培養(yang)；

　　(7)培養第二天，全換液更換為種(zhong)植液2；

　　(8)培養第四天，半(ban)量換液加入5uM的阿糖胞苷，24h全量換液；

　　(9)之后每周(zhou)換液兩次。