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microRNA(miRNA)是一(yi)種大小約21—23個堿(jian)基(ji)(ji)的(de)單鏈(lian)小分子RNA,是由(you)具有(you)發(fa)夾結(jie)構的(de)約70-90個堿(jian)基(ji)(ji)大小的(de)單鏈(lian)RNA前體(ti)經過Dicer酶加工后(hou)生成(cheng),不同于siRNA(雙鏈(lian))但(dan)是和(he)siRNA密切(qie)相關(guan)。microRNA通過和(he)靶基(ji)(ji)因(yin)mRNA堿(jian)基(ji)(ji)配(pei)對(dui)引(yin)導沉默復合(he)體(ti)(RISC)降解(jie)mRNA或抑制mRNA的(de)翻譯(yi),從而在轉錄(lu)后(hou)水平調控(kong)蛋白表達(最新發(fa)現miRNA也能在轉錄(lu)水平調控(kong)基(ji)(ji)因(yin)表達)。miR
DNA甲基(ji)化是(shi)最早發(fa)現的(de)(de)基(ji)因(yin)表(biao)觀修飾方式之一,真(zhen)核生(sheng)物中的(de)(de)甲基(ji)化僅發(fa)生(sheng)于胞(bao)嘧啶,即(ji)在(zai)(zai)DNA甲基(ji)化轉(zhuan)移(yi)酶(DNMTs)的(de)(de)作用下使CpG二核苷(gan)酸5’-端(duan)的(de)(de)胞(bao)嘧啶轉(zhuan)變(bian)為5’-甲基(ji)胞(bao)嘧啶。DNA甲基(ji)化通常抑制基(ji)因(yin)表(biao)達,去(qu)甲基(ji)化則(ze)誘導(dao)了(le)基(ji)因(yin)的(de)(de)重新活(huo)化和表(biao)達。這(zhe)種DNA修飾方式在(zai)(zai)不改變(bian)基(ji)因(yin)序(xu)列前提(ti)下實現對(dui)基(ji)因(yin)表(biao)達的(de)(de)調(diao)控。脊椎(zhui)動(dong)物DNA的(de)(de)甲基(ji)化狀態(tai)與生(sheng)長發(fa)育調(diao)控密切相關,比如在(zai)(zai)腫瘤(liu)發(fa)生(sheng)時,抑癌基(ji)因(yin)CpG島(dao)以外的(de)(de)
腺病(bing)(bing)(bing)毒是一種線性(xing)(xing)雙鏈DNA無(wu)包(bao)膜病(bing)(bing)(bing)毒,對分裂(lie)(lie)期(qi)細(xi)(xi)胞(bao)和非分裂(lie)(lie)期(qi)細(xi)(xi)胞(bao)均具(ju)有感染能力,且(qie)具(ju)有嗜上(shang)皮細(xi)(xi)胞(bao)性(xing)(xing)。重組(zu)腺病(bing)(bing)(bing)毒載(zai)體是以腺病(bing)(bing)(bing)毒為(wei)基(ji)礎發展起來(lai)的(de)工(gong)具(ju)病(bing)(bing)(bing)毒載(zai)體,它可(ke)通過受體介(jie)導(dao)的(de)內吞作用(yong)進(jin)入細(xi)(xi)胞(bao)內,但腺病(bing)(bing)(bing)毒基(ji)因(yin)組(zu)不(bu)整合(he)進(jin)入宿主(zhu)細(xi)(xi)胞(bao)基(ji)因(yin)組(zu)中。腺病(bing)(bing)(bing)毒作為(wei)一種常用(yong)的(de)基(ji)因(yin)操作工(gong)具(ju),在(zai)心血管、肝臟、肌(ji)肉、肺、腫瘤及(ji)其他領域(yu)廣泛(fan)應用(yong)。
過表達慢病(bing)(bing)毒(du)(du)構建及包(bao)裝實(shi)驗(yan):慢病(bing)(bing)毒(du)(du)(Lentivirus)載體(ti)是以 HIV-1 (人(ren)類免疫(yi)缺陷1型病(bing)(bing)毒(du)(du))為基礎發展起來的(de)基因(yin)(yin)治療(liao)載體(ti)。具有感(gan)染譜廣泛、可以有效感(gan)染分裂(lie)期和靜(jing)止期細胞(bao)、長期穩定表達外源基因(yin)(yin)等優點,因(yin)(yin)此成為導入外源基因(yin)(yin)的(de)有力工具。現在慢病(bing)(bing)毒(du)(du)系統已經(jing)被廣泛應用(yong)到各種細胞(bao)系的(de)基因(yin)(yin)過表達、RNA干(gan)擾(rao)、microRNA研究以及活體(ti)動物實(shi)驗(yan)中。
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